α1–抗胰蛋白酶（α1-Antitryposin，α1-AT），分子量11.8KD，是急性时相反应蛋白之一，由肝细胞合成，是人体血清中α1-球蛋白的主要组分，其生物学功能是抑制凝血酶、激态释放酶、纤溶酶、弹性蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶等，在恶性肿瘤、外伤、感染，炎症等状况下，迅速升高。								
  
      
      
      
      
      
      

本法可用于检测正常人血清、体液中α1-AT水平。

原理

用兔抗α1-AT的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别并结合待测标本中的α1-AT，用抗原标记生物素（Bio-Ag），用亲和素标记辣根酶(HRP-A)，向固相酶标板中同时加入标准品（或待测品）和Bio-Ag，两者竞争性的结合到固相抗体上，反应、洗涤后，加入HRP-A，反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Bio-A-HRP和Ab-Ag复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的α1-AT含量。

试剂盒组成

1.       真空包装96孔固相酶标板一块。

冻干的标准品6瓶：分别用标准稀释液0.5mL溶解，浓度为0、1、3、9、27、81µg/mL 。

2.       生物素化抗原（Bio-Ag）1瓶：5mL。

3.       酶稀释液 1 瓶：10mL。

4.       酶结合物1管：20µl，用前每µl加酶稀释液1mL稀释为工作液。

5.       显色剂：A为冻干品：2瓶，B为液体：2瓶。 临用前1瓶A加1瓶B溶解。

6.       终止液1瓶：5mL。

7.       洗涤液1瓶：用前用蒸馏水20倍稀释。

8.       实验缓冲液 1 瓶：20 mL。

注意事项

1 操作  ⑴为保证实验结果的准确性，标准品必须做双孔；条件允许的情况下标准、质控、样品均应做双孔。 ⑵为防止样品蒸发，试验时应将反应板铺于有湿布的密闭盒内。⑶血清、枸橼酸盐或EDTA抗凝血浆均可检测，但血清或血浆中残存凝块或红细胞须经离心去除。⑷标本在2-8℃可贮存3天，超过3天应放入-20℃，避免反复冻融。 ⑸分别用加样器头吸取每份标本，避免相互交叉。⑹因底物易于氧化且对光敏感，一定要用前配置，用后的底物液必须弃去不可再用。⑺显色时室温应在20-25℃。

2 试剂盒储存条件  ⑴除酶结合物存于-20℃外其余试剂均储存于4℃。⑵酶标板在真空条件下可存放6个月，打开后如果不能一次用完，请装于密封性好的袋子内，于4℃干燥处保存，并在一个星期内使用。⑶标准品溶解后于4℃保存可使用一个月。⑷Bio-Ag、HRP-A每次吸取时应尽量避免污染，4℃保存可用6个月。若液体出现浑浊则活性不可再用。

样品处理

取静脉血分离血清，如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过48小时，-20℃保存不超过2个月。血清或血浆样品实验前用缓冲液做1:100倍稀释。

操作步骤

1. ELISA测定α1-AT操作步骤见下表：  加样量（µl）

操作完后用酶联仪在490nm波长测量各孔OD值。

2 计算 ⑴用酶标仪上的ELISA自动分析软件对所测OD值进行处理，选双对数法绘制曲线，直接得出样品浓度。⑵以标准物浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应浓度。本试剂盒的技术参数

1 灵敏度：本测定法灵敏度为1.0 µg/mL。

2 精密度：用本法同时及不同时间检测8份样品，批内变异系数8.4，批间变异系数为12.1。

3 准确度：⑴该抗血清与a1-酸性糖蛋白（500μg/mL）、乳铁蛋白 (100µg/mL)、CRP（10 μg /mL）均无交叉反应。⑵向已知浓度血清中加入定量的a1-AT抗原测定回收率，其低浓度回收率为97.8 , 高浓度回收率为104.1 。

正常参考值

正常献血员血清样品56份测得正常参考值：1488.2±662.0 µg/mL。

建议各实验室应根据条件建立自己的正常对照组。